EKZEMA, PSORIAZ

Dermatologiya va venerologiya byulleteni, N 5-1998, 37–40 sahifalar.

EKZЕMA VA PSORIAZGA CHALINGAN BЕMORLAR QON ZARDOBIDA BIOTIN MIQDORI

1. L. Tishenko

Rossiya Federatsiyasi Xalqlar do‘stligi universitetining teri va tanosil kasalliklari kafedrasi, jinsiy yo‘l bilan yuqadigan kasalliklar kursi, Moskva

Qon zardobida (2 ml) biotinni (B8 vitamini yoki H vitamini) mikrobiologik aniqlashning original usuli ishlab chiqilgan bo‘lib, u gidroksid fosfataza fermenti yordamida biotinning erkin, oqsil bilan bog‘langan va umumiy shaklini o‘rganish imkonini beradi. Ekzema va toshbaqa kasalligi bilan og‘rigan bemorlarda sezilarli biotin yetishmovchiligi aniqlandi. B8 vitamini tarkibining, ayniqsa uning oqsil bilan bog‘langan shaklining sezilarli darajada pasayishi spirtli ichimliklarni  ko‘p iste’mol qiladigan ekzema va psoriazli bemorlarda ham kuzatiladi, bu ushbu dermatozlarni kompleks davolashda biotinni qo‘llash maqsadga muvofiqligini ko‘rsatadi.

Biotin (vitamin B8, H yoki anti-seboreik omil) – bu to‘qimalarning o‘sishi uchun zarur bo‘lgan va oltingugurtni o‘z ichiga olgan organik birikma.

Biotin tarkibida B guruhi vitaminlari bo‘lgan oziq-ovqatlarda mavjud.Uning ko‘p qismi jigar, buyraklar, soya uni, tuxum sarig‘i, xamirturush va no‘xatda mavjud. Inson tanasida biotin ichak bakteriyalari tomonidan sintezlanadi. Biotin normal energiya jarayonlari, o‘sish, yog‘ kislotalari, antitanalar, ovqat hazm qilish fermentlari sintezi va nikotinik kislota metabolizmi uchun zarurdir. Ushbu vitamin insulinga o‘xshash faollikka ega va qonda  shakar miqdorini kamaytiradi [2, 4]. Biotinning ishlashi uchun zarur bo‘lgan o‘nga yaqin ferment tizimi ma’lum. Insonda biotin yetishmovchiligi paytida umumiy zaiflik, ishtahani yo‘qotish, ko‘ngil aynishi, depressiya, uyquchanlik, charchoqning kuchayishi, asabiylashish, og‘riq va mushaklarning kuchsizligi, shuningdek quruq yoki yog‘li teri seboreyasi, yamoqli alopesiya qazg‘oq kuzatiladi [4, 9]. Til rangpar va silliq, og‘iz va halqum shilliq pardalari kulrang (qonsiz). Qonda gemoglobin miqdori kamayadi va xolesterin va shakar darajasi oshadi [2, 3]. Tuxum oqining tarkibiy qismlaridan biri – avidin – biotinni bog‘lash qobiliyatiga ega va u bilan erimaydigan birikma hosil qiladi. Tajribada, ko‘p miqdorda xom tuxum oqini iste’mol qilganda, seboreya, keyinroq soch va tirnoqlarning yo‘qolishi bilan birga eksfoliativ dermatit rivojlanadi. Biotinni tavsiya qilish bu jarayonni bartaraf qiladi. Bu seboreya va soch to‘kilishi ma’lum darajada B8 vitamini yetishmasligi bilan bog‘liq bo‘lishi mumkin degan taxminga olib keldi, shuning uchun uni antiseboreik omil deb atashgan [11].

Neyrodermatit, disgidroz, ekzema, nekrotik akne va psoriaz bilan og‘rigan bemorlarga biotinning samaradorligi to‘g‘risida alohida hisobotlar mavjud. Ritter kasalligi, seboreik ekzema va Leyner-Moussou kasalligi bilan og‘rigan bolalarni davolashda B8 vitaminining samaradorligi ko‘rsatilgan [9, 11].

Materiallar va usullar

Qon zardobida biotin miqdorini aniqlash uchun biz N.A.Pomoshnikova tomonidan taklif qilingan asosiy mahalliy mikrobiologik usul sifatida o‘simlik obyektlarida B5 va B6 vitaminlari miqdorini aniqlash uchun foydalandik [6, 7]. Qonga kelsak, E. M. Raxmalevich va L. D. Tishenko 1963-yilda qondagi B5 va B6 vitaminlarining erkin, oqsil bilan bog‘langan va umumiy shaklini aniqlashning mikrobiologik usullarini ishlab chiqdilar [8].  Keyinchalik, 1975-yilda ana shu usullar asosida xuddi shu mualliflar qondagi B1 va PP vitaminlarini, shu jumladan, bu vitaminlarning erkin, oqsil bilan bog‘langan va umumiy shaklini aniqlashning yangi mikrobiologik usullarini ishlab chiqdilar [10]. Shu bilan birga, xuddi shu mualliflar qondagi biotinni aniqlashning mikrobiologik usulini ham ishlab chiqdilar va klinik sharoitda sinab ko‘rdilar.

Qon zardobida biotinni aniqlash usuli

Bu usulda indikator kultura sifatida juda sezgir xamirturush kulturasi Saccharomycodes ludwigii KM ishlatiladi. Biotin miqdori xamirturushning o‘sib borayotgan massasi bilan belgilanadi. Tajribani o‘tkazish uchun ishlatiladigan xamirturush kulturasi 2% agar qo‘shilgan holda (7 Bal) dan tayyorlangan achchiq agarda o‘stiriladi. Tadqiqot uchun yangi xamirturush kulturasi ishlatiladi, tajribadan 1-2 kun oldin sutli agarda subkultura qilinadi va undan oldin termostatda 27 ° C da saqlanadi. Uning o‘sishi uchun xamirturush kulturasi tashqaridan vitaminlarni olishi kerak: tiamin, piridoksin, biotin, nikotinik va pantotenik kislotalar. Indikator (xamirturush) kulturasi tadqiqot davomida Riderning vitaminlashtirilgan shakar-mineral vositasini tayyorlash uchun mo‘ljallangan. 5 litrga asoslangan Reader vositasining tarkibi quyidagi ingrediyentlarni o‘z ichiga oladi: saxaroza (2%), ammoniy sulfat (0,3%), magniy sulfat (0,07%), osh tuzi (0,05%), kaliy nitrat (0,04%) , kaliy digidrofosfat (0,1%) va kaliy vodorod fosfat (0,01%).

Rider vositasi qaynatilgan vodoprovod suvida tayyorlanadi va avtoklavda 0,5 atm haroratda 30 daqiqa sterilizatsiya qilinadi. Bir vaqtning o‘zida kamida 5 litr Rider vositasini tayyorlash, so‘ngra 500 ml sig‘imli kolbalarga qadoqlash tavsiya etiladi. Reader vositasini tayyorlashda har bir tarkibiy qism 50-100 ml qaynatilgan suvda alohida eritiladi va suv bilan namlangan qog‘oz filtri orqali filtrlanadi. 100 g miqdoridagi saxaroza 500 ml qaynatilgan suvda eritiladi, keyin eritmani yorqinlashtirish uchun 25 g faollashtirilgan uglerod qo‘shiladi. Ushbu eritma Schiyedl apparatida 45 daqiqa davomida chayqatiladi, shundan so‘ng eritma filtrlanadi va retentat (qoldiq) qaynatilgan suv bilan 4-5 marta yuviladi. Avtoklavlangan vosita salqin joyda saqlanadi. Tajriba yakunlanish arafasida takroriy avtoklavlash amalga oshiriladi.  Rider vositasini avtoklavlash paytida cho‘kma hosil bo‘lsa, uni 20-30% sulfat kislota qo‘shib eritish kerak. Vosita 10-15% natriy gidroksid eritmasi bilan neytrallanadi va bromtimol ko‘k indikator yordamida pH 5,6-6,2 gacha yetkaziladi.

Tiamin, nikotinik va pantotenik kislotalar uchun ishchi eritmalar 1 ml ga 1000 mkg va piridoksin uchun – 1 ml ga 100 mkg konsentratsiyada tayyorlanadi.  Kristalli vitaminlardan (B1, B6 va PP) tiamin, piridoksin va nikotinik kislota eritmalari, “Gedeon Richer” yoki “Valsh Farma” firmalaringin kalsiy pantotenatdan pantotenik kislota eritmasi tayyorlanadi. Ushbu vitaminlarning ishchi (va piridoksin uchun – asosiy) eritmasini tayyorlash uchun ularning har biri maxsus elektron yoki elektr tarozida oz miqdorda aniq tortiladi va teng miqdorda millilitrdagi distillangan suvda (masalan, 10,2 ml suvga 10,2 ml ) eritiladi. 1 ml li bunday eritmada 1000 mikrogramm vitamin bo‘ladi. Piridoksinning ishchi eritmasi B6 vitaminining asosiy eritmasini distillangan suv bilan 10 marta suyultirish orqali tayyorlanadi. Tayyorlangan vitaminlar eritmalari 5 daqiqa davomida qaynoq suv bug‘ida sterilizatsiya qilinadi. Vitaminlarning asosiy va ishchi eritmalarini sovuqda saqlash kerak. Ishchi eritmalarning yaroqlilik muddati – 1 oy.

Tadqiqot natijalarini hisoblash uchun biotin uchun standart kalibrlash egri chizig‘ini qurish quyidagicha amalga oshiriladi: tajribadan oldin indikatorli xamirturush kulturasi sutli agarda subkulturalanadi va termostatda 27 C da 1-2 kun davomida  saqlanadi.  Tajriba oldidan sterillangan vodoprovod suvida yetishtirilgan kulturadan suyultirilgan suspenziya tayyorlanadi (xamirturush konsentratsiyasi taxminan 0,01%). 500 ml Rider vositasiga har biri 1000 mkg.li tiamin, nikotinik va pantotenik kislotalar va har biri 100 mkg dan piridoksin, ya’ni vitaminlarning har bir ishchi eritmasidan 1 ml dan qo‘shiladi. Vosita steril tarzda 10 ml li kichik Erlenmeyer kolbalariga quyiladi. Vitaminlashtirilgan shakar-mineral Rider vositasi bo‘lgan bunday kolbalarga biotinning ortib boruvchi miqdori (mkg) ketma-ket qo‘shiladi, uning eritmasi “Roche” kompaniyasining standart, kristalli d-biotinidan bidistillangan suvda tayyorlanadi. Shu bilan birga, 1 mkg vitamin B8 ni o‘z ichiga olgan 1 ml biotin eritmasi 1-kolbaga, 2 mkg 2-kolbaga, 4 mkg 3-kolbaga, 8 mkg 4-kolbaga qo‘shiladi, shundan so‘ng biotinning  kolbalarga qo‘shiladigan miqdori  biotin geometrik emas, balki arifmetik nisbatda ko‘payadi, ya’ni 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36 mkg li biotin eritmasi va 160 mkg gacha vitamin B8 har bir keyingi kolbaga qo‘shiladi.

Kolbalarga bir tomchi yangi tayyorlangan xamirturush kulturasi sepiladi va 27 C haroratda 40-48 soat davomida termostatga joylashtiriladi, shundan so‘ng kolbalarning tarkibi oldindan tortilgan membranali filtrlar (№ 4)(Seitz qurilmasiga o‘rnatilgan) orqali filtrlanadi.  Cho‘kma bilan filtrlar xona haroratida doimiy og‘irligiga qadar quritiladi. Standart egri chiziq chiziladi, quritilgan indikator massasining qiymatlari, xamirturush kulturasi absissa o‘qi bo‘ylab, biotin eritmasining tegishli konsentratsiyasi ordinata o‘qi bo‘ylab chiziladi. Standart kalibrlash egri chizig‘i uch marta takrorlangan tajribaning o‘rtacha ma’lumotlari asosida tuziladi.

Standart egri chiziqni o‘rnatgandan so‘ng, ular qondagi biotinning erkin shakli tarkibini aniqlashga o‘tadilar. Ushbu usulga ko‘ra, biotinni aniqlash uchun 5 ml qon kerak bo‘ladi. Sentrifugalash orqali 2,5 ml zardob olinadi.

Tadqiqotning borishi: tekshiriluvchi qon zardobi mikropipet yordamida 1 ml li kolbalarga vitaminlashtirilgan Rider vositasi (10 ml) bilan solinadi va 1 tomchi yangi tayyorlangan xamirturush kulturasi qo‘shiladi. Kolbalar 40-48 soat davomida termostatda 27C da saqlanadi, shundan so‘ng ularning tarkibi oldindan tortilgan N 4 membranali filtrlar orqali Seitz qurilmasi yordamida filtrlanadi. Xona haroratida quritilgan filtrlar tortiladi. Xamirturush vaznining ortishi standart egri chiziq bo‘yicha biotin miqdorini hisoblash uchun ishlatiladi. 100 ml qon zardobida biotinning erkin shaklini hisoblash uchun standart egri chiziqning ko‘rsatkichlari 100 ga ko‘paytiriladi. Biotinning erkin shaklini aniqlashda usulning xatosi 2% ni tashkil qiladi. Klinik tadqiqotlarda xatoning bu foizi maqbul deb hisoblanadi.

Yuqorida tavsiflangan usul 19 yoshdan 45 yoshgacha bo‘lgan 34 nafar sog‘lom odamni tekshirishda qo‘llanildi.

Sog‘lom odamlarning qon zardobidagi biotinning erkin shaklining miqdori 18 dan 41 ng% gacha va o‘rtacha 28,1-0,2 ng% ni tashkil etdi, bu Yu. M. Ostrovskiy tomonidan olingan sog‘lom odamlarning qon zardobidagi biotin miqdoriga to‘g‘ri keldi. [5].

Biz qon zardobidagi biotinning umumiy shaklini ishqoriy fosfataz yordamida biotin oqsil komplekslarini fermentativ parchalash usuli yordamida aniqladik [1, 12]. Afsuski, organ gidroksid fosfatazni tayyorlash barcha laboratoriyalarda mavjud emas va uning sifati doimiy ravishda nazorat qilinishi kerak. Ishqoriy fosfatazning afzalligi shundaki, u 16 oy davomida muzlatilganda barqaror holatda qoladi. Bundan tashqari, qonning gemolitik xususiyatlari uning faoliyatiga sezilarli ta’sir ko‘rsatmaydi, bu odatda 3-13 birlikni tashkil qiladi.

Qon zardobidagi biotinning umumiy shaklini o‘rganish xuddi erkin shaklini aniqlashga o‘xshab amalga oshiriladi, yagona farq shundaki, o‘rganilayotgan zardobli 1 ml probirkaga yana 0,1 ml ishqoriy fosfataz qo‘shiladi, shundan so‘ng uning tarkibi 60C haroratdagi suv bug‘ida 1 soat davomida saqlanadi. So‘ngra probirka ichidagilar kolbalarga solinadi, ular ichiga birinchi bo‘lib 10 ml vitaminlashtirilgan shakar-mineral Rider vositasi solinadi. Tahlil natijalari ishqoriy fosfataz bilan ishlov berilgan zardobdan foydalanish orqali analogik tarzda o‘rnatilgan  va biotinning umumiy miqdoridagi zardobda mavjud bo‘lgan  xamirturush kulturasining o‘sishini aks ettiruvchi satandart egri chiq bo‘yicha aniqlanadi. Ma’lum bo‘lishicha, sog‘lom odamlarda biotinning umumiy shakli tarkibi 30 dan 80 ng% gacha va o‘rtacha 56,3 0,2 ng% ni tashkil qiladi.

Qon zardobidagi biotinning umumiy va erkin shakllarini o‘rganish B8 vitaminining oqsil bilan bog‘langan shaklini aniqlash imkonini beradi, uning darajasi ushbu vitaminning umumiy va erkin shakllari tarkibi o‘rtasidagi farqga mos keladi.

Sog‘lom odamlarda biotinning oqsil bilan bog‘langan shaklining sarum darajasi 28,2-0,2 ng% ni tashkil qiladi.

Natijalar va muhokama

Ekzema va toshbaqa kasalligi bilan og‘rigan 83 ta bemor, shu jumladan spirtli ichimliklarni  ko‘p iste’mol qiladiganlar qonidagi biotinni aniqlash uchun yuqorida tavsiflangan mikrobiologik usul bilan tekshirildi. Laboratoriya tadqiqotlarining umumiy natijalari jadvalda keltirilgan.